使用注意事項:
1、二氧化碳培養(yǎng)箱未注水前不能打開電源開關,否則會損壞加熱元件。
2、培養(yǎng)箱運行數(shù)月后,水箱內(nèi)的水因揮發(fā)可能減少,當?shù)退恢甘緹袅習r應補充加水。先打開溢水管,用漏斗接橡膠管從注水孔補充加水使低水位指示燈熄滅,再計量補充加 水,然后堵塞溢水孔。
3、CO2傳感器是在飽和濕度下校正的,因此加濕盤必須時刻裝有滅菌水。
4、當顯示溫度超過置定溫度1℃時,超溫報警指示燈亮,并發(fā)出尖銳報警聲,這時應關閉電源30分鐘;若再打開電源開關仍然超溫,則應關閉電源并報維修人員。
5、鋼瓶壓力低于0.2Mpa時應更換鋼瓶。
6、盡量減少打開玻璃門的時間。
7、如果培養(yǎng)箱長時間不用,關閉前必須清除工作室水分,打開玻璃門通風24小時后在關閉。
8、清潔培養(yǎng)箱工作室時,不要碰撞傳感器和攪拌電機風輪等部件.
9、拆裝工作室內(nèi)支架護罩,必須使用隨機扳手,不得過度用力。
10、搬運培養(yǎng)箱前必須排除箱體內(nèi)的水,排水時,將橡膠管緊套在出水孔上,使管口低于儀器,輕輕吸一口,放下水管,水即虹吸流出。
11、搬運培養(yǎng)箱前應拿出工作室內(nèi)的擱板和加濕盤,防止碰撞損壞玻璃門。
12、搬運培養(yǎng)箱時不能倒置,同時一定不要抬箱門,以免門變形。
二氧化碳培養(yǎng)箱的滅菌技術
二氧化碳培養(yǎng)箱是在普通培養(yǎng)的基礎上加以改進,主要是能加入CO2,以滿足培養(yǎng)微生物所需的環(huán)境。主要用于組織培養(yǎng)和一些特殊微生物的培養(yǎng)。二氧化碳培養(yǎng)箱廣泛應用于細胞、組織培養(yǎng)和某些特殊微生物的培養(yǎng),常見于細胞動力學研究、哺乳動物細胞分泌物的收集、各種物理、化學因素的致癌或毒理效應、抗原的研究和生產(chǎn)、培養(yǎng)雜交瘤細胞生產(chǎn)抗體、體外授精(IVF)、干細胞、組織工程、藥物篩選等研究領域。
二氧化碳培養(yǎng)箱是通過在培養(yǎng)箱箱體內(nèi)模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境如穩(wěn)定的溫度(37°C)、穩(wěn)定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對濕度(95%),來對細胞/組織進行體外培養(yǎng)的一種裝置。
在生物活體內(nèi),生物體有自身的免疫系統(tǒng)保護細胞或組織,但是在體外培養(yǎng)時,沒有任何保護自己的免疫屏障。對于二氧化碳培養(yǎng)箱的基本參數(shù)溫度、CO2和濕度,大多數(shù)培養(yǎng)箱都能滿足研究實驗的需要。然而,針對培養(yǎng)過程中面臨的各種污染源,各品牌二氧培養(yǎng)箱的控制方式和效果不盡相同,因此細胞體外培養(yǎng)中zui大的威脅實際上是污染問題。
對于細胞來說,非常理想的培養(yǎng)環(huán)境同樣也適合這些污染物的生存,培養(yǎng)箱本身是不會辨別的,而細胞培養(yǎng)中大部分時間里細胞都是位于培養(yǎng)箱內(nèi),因此箱體內(nèi)能否抑菌或滅菌非常關鍵!
二氧化碳培養(yǎng)箱中的主要污染源:細菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原體、非同種細胞。
支原體:支原體污染后,因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,細胞無明顯變化,外觀上給人以正常感覺,實則細胞已經(jīng)受到多方面潛在影響,如引起細胞變形,影響DNA合成,抑制細胞生長等,往往被大多數(shù)實驗者忽視。
細菌:細菌污染后,培養(yǎng)基1-2天就會變色,對細胞生長影響明顯,應迅速將污染細胞與其它細胞系隔離,滅菌后丟棄,還要用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺。
病毒:由于病毒寄生生存,爆發(fā)后盡快和正常細胞隔離,丟棄處理,相對來說容易處理,對操作者威脅較大;盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
真菌(霉菌和酵母菌):真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了;目前沒有好的抑制方法,包括現(xiàn)在常用的兩性霉素,一旦污染容易反復爆發(fā),尤其孢子很難殺滅。
非同種細胞:即細胞交叉污染,由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。
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